核心(xin)提(ti)示：潔凈室（無菌(jun)室）是微生物(wu)檢(jian)測的重(zhong)要(yao)(yao)(yao)場所與最基(ji)本的設施。它(ta)是微生物(wu)檢(jian)測質量保證的重(zhong)要(yao)(yao)(yao)物(wu)質基(ji)礎。因此它(ta)的設計要(yao)(yao)(yao)按國(guo)家標準(zhun)《潔凈廠房設計規范》、國(guo)家藥(yao)品監(jian)督管理(li)局頒(ban)發的《藥(yao) 品檢驗所(suo)實驗室(shi)(shi)(shi)(shi)質量(liang)管理(li)規范(fan)（試(shi)行(xing)(xing)）》中第十八(ba)條規定執行(xing)(xing)。微生物(wu)(wu)實驗室(shi)(shi)(shi)(shi)潔(jie)凈(jing)室(shi)(shi)(shi)(shi)的(de)施工(gong)、安裝、驗收應(ying)按國家行(xing)(xing)業標(biao)準(zhun)《潔(jie)凈(jing)室(shi)(shi)(shi)(shi)的(de)施工(gong)及驗收規范(fan)》執行(xing)(xing)。對(dui)于微生物(wu)(wu)檢測工(gong)作(zuo)者(zhe)和使用管理(li)者(zhe)來講，更大量(liang)的(de)工(gong)作(zuo)是進行(xing)(xing)正常(chang)管理(li)到日常(chang)的(de)使用。潔(jie)凈(jing)室(shi)(shi)(shi)(shi)（無(wu)菌(jun)室(shi)(shi)(shi)(shi)）的(de)標(biao)準(zhun)要(yao)符合GMP潔凈度標準要求(qiu)。

潔凈室（無菌(jun)室）的使用管理要做到以(yi)下工(gong)作：

1、潔(jie)凈室(shi)（無菌(jun)室(shi)）要符合規范要求：無菌(jun)室(shi)應采光 良好、避(bi)免潮濕、遠(yuan)離廁所及污染區(qu)。面積(ji)一般(ban)不(bu)超過10m2，不小于5m2；高度不超過2.4m。由1—2個緩沖(chong)(chong)間(jian)(jian)、操作(zuo)間(jian)(jian)組成（操作(zuo)間(jian)(jian)和(he)緩沖(chong)(chong)間(jian)(jian)的門不(bu)應直對(dui)），操作(zuo)間(jian)(jian)和(he)緩沖(chong)(chong)間(jian)(jian)之間(jian)(jian)應具備滅(mie)菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖(chong)(chong)間(jian)(jian)內(nei)應有洗手盆、毛(mao)巾、無菌衣褲(ku)放(fang)置架(jia)及掛鉤(gou)、拖鞋(xie)等(deng)，不(bu)應放(fang)置培養箱和(he)其他雜物；無菌室內(nei)應六(liu)面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與(yu)地面、天(tian)花板連接處(chu)應呈(cheng)凹弧形，無縫隙，不(bu)留死角。操作(zuo)間(jian)(jian)內(nei)不(bu)應安(an)裝下水道。

無菌操作室應具有空氣(qi)除菌過濾的單向(xiang)流(liu)空氣(qi)裝置，操作區潔凈度100級(ji)或放置(zhi)同等級(ji)別的(de)超(chao)凈工作(zuo)臺，室(shi)內溫(wen)度(du)控(kong)制18—26℃，相對(dui)濕度45%—65%。緩沖間及操作(zuo)室(shi)內均應(ying)設置能達到空氣(qi)消毒效果的紫外(wai)燈或其他適宜的消毒裝置，空氣(qi)潔凈(jing)級別不(bu)同的相(xiang)鄰房間之間的靜壓差應(ying)大于5Pa，潔凈室（區）與(yu)室外大氣的靜(jing)壓差大于10Pa。無菌室(shi)(shi)內的照(zhao)(zhao)明燈應嵌裝在(zai)天花板 內，室(shi)(shi)內光照(zhao)(zhao)應分布均勻，光照(zhao)(zhao)度不(bu)低(di)于300lx。緩沖(chong)間和(he)操作間所設(she)置的(de)紫外線殺菌燈(deng)（2—2.5w/m3），應定期檢查(cha)輻射(she)強度(du)，要(yao)求在操作(zuo)面上達40uw/m2。不符合要求的紫外殺菌燈應及時更換。

 2、建立使用(yong)登記制度

在登記冊中可設(she)置以下項目(mu)內容：如使用日期(qi)、時間、使用人、設(she)備運行狀(zhuang)(zhuang)況、溫度、濕(shi)度、潔凈度狀(zhuang)(zhuang)態（沉(chen)降(jiang)菌(jun)(jun)數、浮游(you)菌(jun)(jun)數、塵(chen)埃粒子數 ）、報(bao)修原(yuan)因、報(bao)修結(jie)果、清潔工作(zuo)（臺面(mian)、地面(mian)、墻(qiang)面(mian)、天(tian)花板、傳遞窗、門把(ba)手）、消毒液名稱等。

3、建立使用標準操作(zuo)規(gui)范（SOP）并嚴(yan)格管理:SOP內容至少(shao)要有(you)以下幾點(dian)：

（1）規定凈化(hua)系統(tong)使(shi)運轉(zhuan)時間要求(qiu)每次實驗前(qian)應開啟(qi)凈化(hua)系統(tong)使(shi)運轉(zhuan)至(zhi)少1h以上，同時開(kai)啟凈化臺和紫外燈。

（2）物品(pin)進(jin)入(ru)(ru)潔(jie)(jie)凈室(shi)(shi)（無菌室(shi)(shi)）基本要求：凡進(jin)入(ru)(ru)潔(jie)(jie)凈室(shi)(shi)（無菌室(shi)(shi)）的物 品(pin)必須先(xian)在第一緩沖(chong)間(jian)內對(dui)外部表面用消(xiao)毒劑消(xiao)毒滅菌，再經(jing)物流(liu)緩沖(chong)間(jian)、傳遞窗1h以上，及無菌空氣吹(chui)干(gan)后送入無菌室(shi)。注意帶纖維(wei)、易發塵物品(pin)(pin)不得(de)帶進凈化實驗室(shi)。無菌室(shi)內固定物品(pin)(pin)不得(de)任意搬(ban)出。

（3）人(ren)員(yuan)進(jin)入(ru)(ru)潔凈(jing)室(shi)（無(wu)菌(jun)(jun)室(shi)）要求(qiu)：實驗人(ren)員(yuan)進(jin)入(ru)(ru)潔凈(jing)室(shi)（無(wu)菌(jun)(jun)室(shi)）不(bu)得(de)化妝、帶手(shou)(shou)表(biao)、戒指等(deng)首飾(shi)；不(bu)得(de)吃東西、嚼(jiao)口(kou)香糖。應清潔手(shou)(shou)后(hou)進(jin)入(ru)(ru)第(di)(di)一緩(huan)沖(chong)間更衣，同時(shi)換上消(xiao)毒隔(ge)離拖鞋(xie)，脫(tuo)去外衣，用消(xiao)毒液消(xiao)毒雙手(shou)(shou)后(hou)戴上無(wu)菌(jun)(jun)手(shou)(shou)套(tao)，換上無(wu)菌(jun)(jun)連(lian)衣帽（不(bu)得(de)讓頭發、衣等(deng)暴(bao)露在外面(mian)），戴上無(wu)菌(jun)(jun)口(kou)罩。然后(hou)，換或是再戴上第(di)(di)二(er)副無(wu)菌(jun)(jun)手(shou)(shou)套(tao)，在進(jin)入(ru)(ru)第(di)(di)二(er)緩(huan)沖(chong)間時(shi)換第(di)(di)二(er)雙消(xiao)毒隔(ge)離拖鞋(xie)。再經風淋室(shi)30s風淋(lin)后進入無菌室(shi)。

（4）溫(wen)濕度(du)(du)觀察要求：觀察溫(wen)度(du)(du)計、濕度(du)(du)計上(shang)顯示的(de)溫(wen)濕度(du)(du)是否在規定的(de)范圍內，并作為實(shi)驗(yan)原(yuan)(yuan)始數據記錄(lu)在案(an)。如發現問題應及(ji)(ji)時尋找原(yuan)(yuan)因，及(ji)(ji)時報修和(he)及(ji)(ji)時報告實(shi)驗(yan)室主管，并將報修原(yuan)(yuan)因和(he)結果記錄(lu)歸(gui)檔。

（5）沉降(jiang)菌落(luo)計(ji)數(shu)與浮游菌測定要求：在(zai)(zai)每(mei)次實(shi)驗同時，對操(cao)作室(shi)和層(ceng)流臺做微生物沉降(jiang)菌落(luo)計(ji)數(shu)，將結果記(ji)錄在(zai)(zai)使用登記(ji)本上，并作為實(shi)驗環(huan)境原始數(shu)據記(ji)錄在(zai)(zai)實(shi)驗報告上。每(mei)周1次，或在(zai)無菌檢查等必要時(shi)，在(zai)每次實(shi)驗(yan)同(tong)時(shi)對操作室和凈化臺進行浮游菌測定，將結果記(ji)錄(lu)在(zai)使用登記(ji)本上，并作為(wei)實(shi)驗(yan)環境(jing)原(yuan)始(shi)數據記(ji)錄(lu)在(zai)實(shi)驗(yan)報告(gao)上。

（6）消毒要求(qiu)：無菌室每(mei)周和每(mei)次操作前用0.1%新潔爾(er)滅或2%甲酚液或(huo)其(qi)他適宜消(xiao)毒(du)液（常用消(xiao)毒(du)劑的品種有(you)：5—20倍稀釋的碘伏水溶液(ye)、0.1%新潔爾滅溶液(ye)、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來(lai)蘇兒）消(xiao)毒溶液、2%戊(wu)二醛水溶(rong)液、尼(ni)泊金乙醇消毒液（處方：對羥(qian)基(ji)苯甲(jia)酸甲(jia)酯21.5g；對羥基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用(yong)(yong)的(de)消(xiao)毒劑品種與(yu)使用(yong)(yong)要進行有效性驗(yan)證方(fang)可(ke)使用(yong)(yong)，并定期更換消(xiao)毒劑的(de)品種）擦拭操作臺及可(ke)能(neng)污染的(de)死角，方(fang)法是用(yong)(yong)無菌紗布浸(jin)漬消(xiao)毒溶(rong)液清潔(jie)超凈(jing)(jing)臺的(de)整(zheng)個內表面、頂面、及無菌室、人(ren)流、物流、緩(huan)沖間的(de)地板、傳遞窗(chuang)、門把手。清潔(jie)消(xiao)毒程序應從內向外，從高潔(jie)凈(jing)(jing)區(qu)到低潔(jie)凈(jing)(jing)區(qu)。逐步向外退出潔(jie)凈(jing)(jing)區(qu)域。然后(hou)開啟(qi)無菌空氣過濾器(qi)及紫外燈(deng)殺菌1—2h，以殺(sha)滅存留微生物。在每次操作(zuo)完畢，同樣用上(shang)述消毒溶(rong)液擦拭(shi)工作(zuo)臺(tai)面，除去室內濕氣，用紫外(wai)燈殺(sha)菌30min。

（7）其他要(yao)求：如遇停電(dian)，應(ying)立(li)即(ji)停止實(shi)驗，離(li)開(kai)(kai)無菌(jun)室。關閉所有(you)電(dian)閘(zha)。重新進入(ru)無菌(jun)室前至少開(kai)(kai)啟機房運轉1h以(yi)上。

4、潔凈度(du)檢(jian)查(cha)的要求與方(fang)法(fa)：無(wu)菌(jun)室(shi)在消毒處理后，無(wu)菌(jun)試驗前(qian)及操作過程中(zhong)需(xu)檢(jian)查(cha)空氣中(zhong)菌(jun)落數，以此(ci)來(lai)判斷無(wu)菌(jun)室(shi)是否達到規定(ding)的潔凈度(du)，常有沉降菌(jun)和浮(fu)游菌(jun)測定(ding)方(fang)法(fa)。

（1）沉降(jiang)菌(jun)檢測方(fang)法及標準：以無(wu)菌(jun)方(fang)式將3個營養瓊脂(zhi)平板帶(dai)入無(wu)菌操作室，在(zai)操作區臺面左(zuo)、中、右各放1個；打開平板蓋(gai)，在空氣 中(zhong)暴露(lu)30min后將平板蓋好，置32.5℃士(shi)2.5℃培養(yang)48h，取出檢查(cha)，3個平板上生長的菌(jun)落數平均小(xiao)于(yu)1個。

（2）浮游菌檢測方法及標準(zhun)：用(yong)專門的(de)(de)采(cai)(cai)(cai)樣(yang)器(qi)(qi)(qi)(qi)，宜采(cai)(cai)(cai)用(yong)撞擊法機制的(de)(de)采(cai)(cai)(cai)樣(yang)器(qi)(qi)(qi)(qi)，一般采(cai)(cai)(cai)用(yong)狹縫式(shi)或離心式(shi)采(cai)(cai)(cai)樣(yang)器(qi)(qi)(qi)(qi)，并配有流量計(ji)和定時(shi)器(qi)(qi)(qi)(qi)，嚴格按儀器(qi)(qi)(qi)(qi)說明書的(de)(de)要求操作并定時(shi)校(xiao)檢，采(cai)(cai)(cai)樣(yang)器(qi)(qi)(qi)(qi)和培養(yang)(yang)(yang)皿進入被(bei)測房間(jian)(jian)前先用(yong)消毒房間(jian)(jian)的(de)(de)消毒劑滅菌，使用(yong)的(de)(de)培養(yang)(yang)(yang)基為營養(yang)(yang)(yang)瓊脂培養(yang)(yang)(yang)基或藥典認(ren)可的(de)(de)其他培養(yang)(yang)(yang)基。使用(yong)時(shi)，先開(kai)動真(zhen)空泵抽氣，時(shi)間(jian)(jian)不少(shao)于5min，調(diao)節流量、轉盤、轉速 。關閉真(zhen)空泵，放入培養皿，蓋上采(cai)樣(yang)器(qi)蓋子后調(diao)節縫(feng)隙高(gao)度。置(zhi)采(cai)樣(yang)口采(cai)樣(yang)點后，依次開啟采(cai)樣(yang)器(qi)、真(zhen)空泵，轉動定(ding)時器(qi)，根據(ju)采(cai)樣(yang)量設定(ding)采(cai)樣(yang)時間(jian)。全部(bu)采(cai)樣(yang)結束后，將培養皿置(zhi)32.5℃士2.5培(pei)養48h，取出檢(jian)查，浮游菌(jun)落(luo)數平均不得超過(guo)5個/m3。

每批培(pei)養基應選定3只培養(yang)(yang)皿做對照(zhao)培養(yang)(yang)。

無菌操作(zuo)(zuo)臺面或(huo)超凈工作(zuo)(zuo)臺還(huan)應定期檢測其(qi)懸(xuan)浮粒(li)子，應達到(dao)100級（一般用塵埃粒子(zi)計數儀）檢測，并(bing)根(gen)據無菌(jun)狀況必(bi)要時置換過濾器。

5、定期進行潔凈度再驗證：定期（每(mei)季度、半年、1年）或當(dang)潔凈室設(she)施發生重大改(gai)變時，要按國家(jia)標準GB/T16292-16294-1996《醫藥工業(ye)潔(jie)凈(jing)室（區）懸浮粒子、浮游菌(jun)和(he)沉降菌(jun)的(de)(de)(de)測(ce)試方法》進(jin)行潔(jie)凈(jing)度再驗(yan)證，以確保(bao)潔(jie)凈(jing)度符合規定(ding)，保(bao)存(cun)驗(yan)證原(yuan)始記錄(lu)，定(ding)期歸檔保(bao)存(cun)，并將(jiang)驗(yan)證結果記錄(lu)在無菌(jun)室使用登記冊上，作為實驗(yan)環境原(yuan)始依據(ju)及趨(qu)勢分析資料。并定(ding)期對潔(jie)凈(jing)室的(de)(de)(de)環境檢測(ce)數據(ju)進(jin)行趨(qu)勢分析和(he)評估，根據(ju)評估結果，了解潔(jie)凈(jing)室設(she)施(shi)環境質量的(de)(de)(de)穩定(ding)狀況及變化(hua)趨(qu)勢，決定(ding)是否有(you)必要修訂相應的(de)(de)(de)警戒和(he)糾偏限度。

6、定期更(geng)換新的紫外燈管、更(geng)換凈(jing)化(hua)系(xi)統的初效、中效、高效頭：定期（至少每年1次）更換新的紫外(wai)燈管(guan)，以確保(bao)紫外(wai)燈管(guan)滅菌(jun)持(chi)續(xu)有效(xiao)。并(bing)同時在使用登記本上做(zuo)好更換記錄(lu)，定期歸檔保(bao)存。至少2年1次，或(huo)按潔(jie)凈(jing)度(du)驗(yan)證(zheng)實際情況，定(ding)期(qi)更換(huan)初效、中效、高效頭。以確保(bao)凈(jing)化系(xi)統的功能持續有效，并(bing)同時在使(shi)用登記本上做好(hao)更換(huan)記錄，定(ding)期(qi)歸檔保(bao)存。

7、使(shi)用過程中應(ying)盡可能減(jian)(jian)少(shao)人(ren)(ren)員的(de)走動(dong)(dong)或活(huo)(huo)動(dong)(dong)：平時實驗室內應(ying)盡可能減(jian)(jian)少(shao)人(ren)(ren)員的(de)走動(dong)(dong)或活(huo)(huo)動(dong)(dong)，同(tong)向潔凈室的(de)門(men)要關閉(bi)或安裝自動(dong)(dong)閉(bi)門(men)器使(shi)其(qi)保(bao)持關閉(bi)狀態。

8、潔凈(jing)度不(bu)符(fu)合規定(ding)時立即停止(zhi)使(shi)(shi)(shi)用：發(fa)現潔凈(jing)度不(bu)符(fu)合規定(ding)時，應(ying)立即停止(zhi)使(shi)(shi)(shi)用，尋(xun)找原因，清潔、必須經潔凈(jing)度再(zai)驗證(zheng)符(fu)合規定(ding)后，才再(zai)使(shi)(shi)(shi)用，并同(tong)時將情況(kuang)記(ji)錄在無菌室使(shi)(shi)(shi)用登記(ji)冊上，定(ding)期歸檔保存。

9、對進入(ru)的外來人(ren)(ren)(ren)(ren)員(yuan)或維修人(ren)(ren)(ren)(ren)員(yuan)進行(xing)指導和監(jian)督：非微生物室(shi)檢驗人(ren)(ren)(ren)(ren)員(yuan)不得(de)進入(ru)潔凈室(shi)（無菌室(shi)），對必須進入(ru)的外來人(ren)(ren)(ren)(ren)員(yuan)或維修人(ren)(ren)(ren)(ren)員(yuan)要進行(xing)指導和監(jian)督。

10、潔(jie)凈(jing)室(shi)(shi)（無(wu)(wu)(wu)菌(jun)室(shi)(shi)）的(de)日常管(guan)理：建立(li)安(an)全衛生(sheng)(sheng)值日制(zhi)度，一旦發現通風系統、墻壁、天花板、地面(mian)、門窗及公用介(jie)質系統等設(she)施有(you)損(sun)壞現象(xiang)，要及時(shi)報告(gao)并(bing)(bing)采(cai)取相應的(de)修(xiu)復措施，并(bing)(bing)保(bao)存(cun)記(ji)錄及時(shi)歸檔。從潔(jie)凈(jing)室(shi)(shi)（無(wu)(wu)(wu)菌(jun)室(shi)(shi)）環境中(zhong)檢(jian)測(ce)到的(de)微生(sheng)(sheng)物應能鑒(jian)別(bie)至屬(shu)或種，保(bao)留鑒(jian)別(bie)實驗(yan)原始記(ji)錄及菌(jun)種，作為(wei)無(wu)(wu)(wu)菌(jun)生(sheng)(sheng)產、無(wu)(wu)(wu)菌(jun)檢(jian)查潔(jie)凈(jing)室(shi)(shi)環境質量、消毒劑有(you)效(xiao)性評估及污染源(yuan)調查的(de)依據，并(bing)(bing)且也(ye)是為(wei)無(wu)(wu)(wu)菌(jun)檢(jian)查陽性結果的(de)調查提供第一手資料。