核心提示： 酶(mei)(mei)標(biao)儀作(zuo)為一(yi)(yi)個常用的儀器，其基本功(gong)能(neng)不外乎(hu)一(yi)(yi)個比色(se)測(ce)定(ding)，與比色(se)計(ji)所不同的是在測(ce)定(ding)波長范(fan)圍(wei)、吸光(guang)度范(fan)圍(wei)、光(guang)學系(xi)統、檢測(ce)速度、震(zhen)板(ban)功(gong)能(neng)、溫(wen)度控制、定(ding)性和定(ding)量測(ce)定(ding)軟件功(gong)能(neng)等方面的差異(yi)，當然全自動酶(mei)(mei)免疫(yi)分析(xi)系(xi)統還具有自動洗板(ban)、溫(wen)育、加樣等功(gong)能(neng)。我們(men)在選(xuan)購酶(mei)(mei)標(biao)儀時應該考慮如下幾個關鍵參(can)數：

濾光(guang)系統

酶標儀簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說，可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些酶標儀里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測，本質上還只是把濾片和光柵放在了一起，并沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。

光(guang)(guang)柵型濾(lv)光(guang)(guang)系(xi)(xi)統具有使用(yong)方便，可以(yi)進行(xing)(xing)光(guang)(guang)譜掃描，靈活性(xing)等優(you)點。當(dang)然，濾(lv)光(guang)(guang)片系(xi)(xi)統也有其(qi)顯著的(de)優(you)勢，例如價格較為便宜(yi)，檢(jian)測(ce)(ce)靈敏度高，帶寬的(de)可選(xuan)擇性(xing)，可以(yi)進行(xing)(xing)快速的(de)濾(lv)光(guang)(guang)片切換，可配備有自動加(jia)樣(yang)系(xi)(xi)統，在化學發光(guang)(guang)檢(jian)測(ce)(ce)中光(guang)(guang)線的(de)透(tou)過(guo)率高。

目前，濾(lv)光片(pian)系統應用更(geng)廣，因為它可以(yi)讓實驗(yan)(yan)者完成(cheng)更(geng)多的試驗(yan)(yan)。

測定波長(chang)

一般酶標儀的測定波長在400～750nm或800nm之間，可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下，經HRP作用，分別氧化為2，2，—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5．0左右時，DAB在450nm波長處有最大吸收，當pH值降為L 0時，最大吸收波長移至492 nm，同時摩爾消光系數變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有最大消光系數，如果HRP量少，H：O：和TMB過量時，則形成藍色的陽離子根。降低pH，即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min。因此，450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件，可以同時安裝6～8片濾光片，所配備的濾光片均應包括上述兩個波長，有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時，有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定，故酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能，此時需要一個340 nm波長濾光片。此時，酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。

酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長"就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定；而“雙波長"則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定，酶標儀最后打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，最好使用雙波長，且不必設空白孔。

測(ce)定的吸光度(du)范圍

通常，酶標儀的吸光度測定范圍在0～2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0～2.5之間，但現在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。因此，對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。

光(guang)學系統

酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現出來。光學系統好的話，則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

檢(jian)測(ce)速(su)度

酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標儀檢測速度都非常快，通常在數秒鐘內。

震(zhen)板(ban)功能(neng)

酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻，使板孔內顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節；有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀，在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標儀上測定即可。

溫(wen)育功(gong)能

溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動精確地控制儀器內部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標儀具有此種功能，溫育功能只是酶標儀的一個附加功能，是否具有并不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優劣。作為實驗室是否選擇，則可根據自己實驗室的條件及需要來決定。

軟件功能(neng)

軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學、紫外和凝集等數據的統計分析并報告結果的功能。軟件功能是中高檔酶標儀的一個非常重要的功能。如果硬件方面區別不大，則軟件就成為判定酶標儀優劣的惟一指標。對于用戶來說，好的軟件功能，對實際工作會有較大的幫助。ELISA定性測定，酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定“灰區"(即指測定吸光度處于cut—off周圍的一定區域，此區域內結果應為“可疑")的統計計算功能，不但方便了實驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實用價值。因此，如目的是定量測定，則在酶標儀的軟件功能中，最好要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算，則可根據酶標儀的應用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類回歸計算就很有必要。

此外，酶標(biao)儀兼做酶標(biao)動力學、凝集反應測定所(suo)需的軟件是否應具(ju)備(bei)，當(dang)然也(ye)應根據使用目(mu)的而定。由于此類軟件一(yi)般都較為昂貴，酶標(biao)儀常另外單(dan)獨按需配備(bei)，如果不是實驗室特殊(shu)需要，就不必強求這種軟件功能。 

語言界面

通常進口的中高檔酶標儀人機對話多采用英文。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難，從而難以最大限度地發揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題，已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實驗室技術人員的使用。

綜(zong)上所述，盡管酶(mei)標儀的(de)發(fa)展極為快速，種(zhong)類繁多，功能也不斷加強，但其最根本(ben)的(de)功用(yong)是不變的(de)，即比色(se)測定。大凡比色(se)測定，其基本(ben)要求就是在(zai)一定吸(xi)(xi)光度(du)范(fan)圍(wei)內要有好的(de)測定準確(que)性(xing)(xing)、線(xian)性(xing)(xing)和(he)精密(mi)性(xing)(xing)。同(tong)樣的(de)吸(xi)(xi)光度(du)范(fan)圍(wei)，測定的(de)準確(que)性(xing)(xing)、線(xian)性(xing)(xing)和(he)精密(mi)性(xing)(xing)越好則酶(mei)標儀亦越佳。

而且(qie)，由(you)于用于酶(mei)標儀比色測(ce)定(ding)的(de)(de)(de)為(wei)多孔(kong)(kong)(kong)(通常為(wei)96孔(kong)(kong)(kong))微孔(kong)(kong)(kong)板(ban)條(tiao)，為(wei)保證測(ce)定(ding)的(de)(de)(de)孔(kong)(kong)(kong)間重復(fu)性，則測(ce)定(ding)速度(du)也是(shi)一(yi)個較重要的(de)(de)(de)性能(neng)(neng)指標。至于其他如震板(ban)、溫(wen)育及有關的(de)(de)(de)軟(ruan)件功能(neng)(neng)，則是(shi)選(xuan)配(pei)功能(neng)(neng)，不影響酶(mei)標儀其他的(de)(de)(de)使用性能(neng)(neng)。